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双色球随机选号:Donor vector

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   CRISPR是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。Cas9系統中,crRNA(CRISPR-derived RNA)與tracrRNA(trans-activating RNA)結合形成的復合物能特異性識別靶基因序列,并引導Cas9核酸內切酶在靶定位點剪切雙鏈DNA,隨后,細胞的非同源末端連接修復機制(NHEJ)重新連接斷裂處的基因組DNA,并引入插入或缺失突變。多數基因組編輯過程產生單或雙等位基因的比例在1-80%之間,并受制于實驗室平臺、細胞轉染效率、細胞類型和靶點DNA?;諶绱碩啾淶謀嗉Ч?,下游細胞株的篩選十分困難。


   因此,在供體Donor載體上加入熒光或抗生素標記,對基因的敲入、敲除及其有效。中洪博元生物提供多種抗性或熒光的Donor載體,并可以選擇使用普通載體瞬轉,或使用超高滴度的腺病毒載體輸送供體DNA和Cas9蛋白。突變型Cas9(通常為D10A)設計為只切斷gRNA靶位點DNA的一條鏈,再通過Donor DNA被同源定向修復(HDR)修復,比NHEJ更不易出錯。



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