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双色球基本走势图500:慢病毒包裝

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產品介紹 
      慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點,因此成為導入外源基因的有力工具。現在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中。
 
中洪服務項目
 
     中洪博元生物提供慢病毒載體構建、RNAi(shRNA)、miRNA、過表達和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務。

    

     中洪博元公司的慢病毒產品主要為第四代質粒系統,其特點為高表達,高滴度,快速克隆和易檢測。慢病毒滴度可達到1E+8 TU/mL,不必濃縮和純化,就能感染目的細胞并且通過GFP發出的綠色熒光來篩選,可以不同實驗者的實驗需求,使后續的實驗更加方便快捷。

整體實驗流程
 
(一) 實驗流程(1、2、3為并列步驟)
 
      1. 慢病毒過表達質粒載體的構建 設計上下游特異性擴增引物,同時引入酶切位點,采用PCR技術(采用高保真KOD酶,3K內突變率為0%)從模板中(cDNA質?;蛘呶目猓┑魅∧康幕駽DS區(coding sequence)連入T載體。將CDS區從T載體上切下,裝入慢病毒過表達質粒載體。
 
     2. 慢病毒干擾質粒載體的構建 合成siRNA對應的DNA頸環結構,退火后連入慢病毒干擾質粒載體。
 
     3. miRNA載體構建從 Genomic 中調取基因相應的Mir 前體, 并在調取引物中引入酶切位點。
 
     4. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝原件載體質粒(兩質粒包裝系統),三種質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提,共轉染293T細胞,轉染后6 h 更換為完全培養基,培養48和72h后,分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,病毒上清液通過超離心濃縮病毒。

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